Как проводится диагностика СПИДа иммуноблотом на ВИЧ?

Может ли иммуноблот на вич быть ложным

Как проводится диагностика СПИДа иммуноблотом на ВИЧ?

ИММУНОБЛОТ (western blot) – метод лабораторного исследования сыворотки крови на присутствие антител к ВИЧ; это более точный анализ, чем ИФА, и используется для подтверждения результатов ИФА. ИФА – иммуноферментный анализ (ELISA) –лабораторное исследование, позволяющее определить присутствие в крови ВИЧ-антител; тест на ВИЧ-антитела.

По рекомендации ВОЗ иммуноблотинг (вестерн-блот) используется при диагностике ВИЧ-инфекции в качестве дополнительного экспертного метода, который должен подтверждать результаты ИФА . Обычно этим методом перепроверяют положительный результат при ИФА, поскольку он считается более чувствительным и специфичным, хотя более сложным и дорогим.

Иммунный блоттинг сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим разделением белков вируса в геле и их переносом на нитроцеллюлозную мембрану. Процедура иммуноблота состоит из нескольких стадий (см. рис.).

Сначала предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов ВИЧ подвергается электрофорезу, при этом все входящие в состав вируса антигены разделяются по молекулярному весу.

Затем методом блоттинга антигены переносят из геля на полоску нитроцеллюлозы или нейлонового фильтра, которые отныне содержат невидимый пока глазом спектр белков, характерный для ВИЧ. Далее на стрип наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.

), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им полосками белков-антигенов. В результате последующих манипуляций (подобных ИФА) результат этого взаимодействия визуализируется — делается видимым. Наличие полос на определённых участках стрипа подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

Иммунный блоттинг чаще всего используют для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции. ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум белкам оболочки ВИЧ.

Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (gp160, gp120, gp41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, с использованием набора другой серии или другой фирмы.

Если и после этого результат остается сомнительным, исследования продолжаются через каждые 3 месяца.

Для проведения иммуноблотинга на первом этапе белки, содержащиеся в сыворотке крови, разделяют в геле по их молекулярной массе и заряду с помощью электрического поля (методом электрофореза в геле). Затем на гель накладывают нитроцеллюлозную или нейлоновую мембрану и «промокают» (это и есть блоттинг).

Это осуществляют в специальной камере, которая позволяет осуществить полный пернос материала из гела на мембрану. В результате та картина расположения белков, которая была на геле, воспроизводится на мембране (блот), с которой можно далее легко манипулировать.

Первоначально мембрану обрабатывают антителами к искомому антигену, а после отмывки несвязанного материала, добавляют радиоактивно меченный коньюгат, который специфически связывается с антителами (как в ИФА).

Местоположение образующегося комплекса антиген — антитело — меченый коньюгат определяют с помощью авторадиографии с использованием рентгеновской пленки. После ее проявления все становится ясным, есть антигены в крови или их нет.

Калькуляторы

Сайт предназначен для медицинских и фармацевтических работников 18+

Анализ на ВИЧ при аутоиммунном заболевании

Здравствуйте! Хочу обследоваться на ВИЧ, была связь с партнером неизвестного статуса.

Проблема в том, что уже 4 года болею системной красной волчанкой, сейчас болезнь в стадии ремиссии, бывают незначительные обострения раз в 2-4 недели.

Боюсь сдавать анализы с спид-центре, поскольку есть вероятность ложноположительного ИФА (аутоимунное заболевание + высокий титр антинуклеарных антител). Какие методы исследований можно применять в моем случае?

Добрый вечер Илья! Получили вот такие результаты ВН 16190 CD-4 721, 25% все остальное в норме, анализы хорошие. Женьщина 59 лет. Половой жизнью не живет 12 лет.

За последниз 2 года операционных вмешательств не было, зубы не лечила, переливание не делала. Врачи утверждают только половой путь передачи. Наркотики исключены.

До этого сдавала на ВИЧ не раз, результати были отрицательными. Возможно аутоиммунное заболевание?

Нет, это ВИЧ-инфекция, без вариантов. О пути инфицирования можно гадать долго, но это не продуктивно.
Начинать терапию.

Спасибо за ответ! Врачи не дают терапию, назначили анализы через 4 месяца, говорят до 100 тыс. не нужно лечение. В июне ВН была 21000 сейчас снизилась. Ждут может опять снизиться без терапии. Если назначить терапию, то это пожизненно?

Снизится, повысится… А что это меняет? Чего ждете то?
Почитайте обзор по началу терапии, как на этот вопрос смотрят сегодня в мире.

Подскажите пожалуйста,у меня язвенный колит, тотальное поражение. Впереди терапия. Как она повлияет на течение колита?

Кто бы знал. Время покажет. Нельзя такое спрогнозировать. Надеемся на лучшее.

Здравствуйте! Подскажите пожалуйста увеличивает ли болезнь рассеянный склероз «окно» в которое инфекцию не видно по анализу? Если увеличивает то насколько примерно? Через сколько недель/месяцев в данном случае будет достоверный анализ? Спасибо)

Нет, не увеличивает.

Добрый день!
Скажите пожалуйста, саркоидоз в анамнезе может увеличить серонегативное окно по вич?

Подскажите, пожалуйста, еще: всякие «женские», гинекологические заболевания и заболевания эндокринной системы, как щитовидная железа или узелки в молочной железе могут задержать образование антител? Или антиген все равно определяется? ( минус в 3, 4,5, 7, 10,5, 12 недель — не могу успокоиться)
Спасибо

Аутоиммунный тиреоидит никак на достоверность анализов не может повлиять и удлинение окна?

Здравствуйте! Скажите, отрицательный ИФА на сроке 3, 4,5, 7, 10, 12 недель полностью исключает вич даже при аутоиммунных заболеваниях? У меня диагностированных заболеваний нет, но успокоиться не могу. И еще, прием аскорутина никак не влияет на анализ?

Спасибо

Даже. И остановиться в вашем случае следовало на цифре 7 точно. Аскорутин не влияет.

Илья извиниясь, а что тогда задержит? Преднизолон-иммуносупрессор, его цистерну надо в себя влить после па чтобы антитела задержались??

Кушайте цитостатики, заедайте глюкокортикоидами, и пока вы так делаете, вы будете уязвимы к болезням, и в т.ч. из-за того, что клеточки, которые должны опосредовать иммунный ответ, короче, с ними все плохо, но не безнадежно, иначе помрете и все. Но как только прекратите, то все довольно быстро придет к исходному.

Добрый вечер!Может ли повлиять на результат ифа(отриц), то есть дать ложно оьрицательный(сдан на сроке 10недель)тот факт что за год до па, лежал вбольнице с отеком квинке и мне в течение 7 суток ставили системы с преднизолоном?? То есть могло ли событие годовой давности так сильно подавить иммунитет и антитела сейчас не вырабатываются в положенные сроки? Нужео пересдать ифа?

Даже если бы за пару недель до — нет.

Спасибо! Просмотрела сейчас перечни анализов ПЦР, которые можно сделать в частных лабораториях нашего города — ВИЧ нет нигде. В спид центре ПЦР не делают. т.е. не делают нигде вообще. а как же, например, контролируют состояние деток, рожденных от инфицированных матерей? там же ИФА неуместен. Очень странно. получается, анализ ТОЛЬКО в спидцентре, а там ТОЛЬКО ИФА, который неспецифичен!

Начинаю понимать вич-диссидентов, извините за эмоции(((

Значит не контролируют или есть, но не пишут, тут одно из двух.

Особенно странно то, что раньше было! Не могу представить себе адекватного объяснения, почему анализ на ВИЧ убрали из ВСЕХ частных лабораторий. Даже если допустить, что где-то этот анализ делали неадекватно, и поэтому все «закоротили» на спид-центр. но ИФА, который там делают, достоверным никак не назовешь.

Почему нет альтернатив и уточняющих анализов??
Еще раз прошу прощения за эмоции. Тем более что они вызваны непонятными административными процессами, тем более в соседнем государстве.

Но, судя по всему, мне лучше не проверяться вообще, если сравнить мизерный риск при однократном ПА с реальным риском заполучить «+», который я не смогу ни перепроверить, ни подтвердить, ни опровергнуть.

Купите аптечный экспресс-тест в сети. Кстати, у них немного больше шанс ложноположительного результата, чем у лабораторного, и вот если с ним будет отрицательно, то можно быть уверенной, что в любой лаборатории тоже будет отрицательно.

Да, я тоже думаю об этом. Лучше брать те, что проверяют слюну или кровь? И через какое (примерно) время после обострения СКВ имунка «успокаивается»?

2 дня назад воспалились суставы, сейчас думаю лучше не делать

Кровь. Не важно когда, напротив, лучше посмотреть в самый разгар, чтобы отбросить в будущем все сомнения.

Спасибо за ответ! Но у меня тогда еще вопросы: Иммуноблот при СКВ может быть ложноположителен? Или влияние аутоимунки в этом анализе отметается? Звонила в СПИД-центр, они делают только ИФА!! И парадокс в том, что ВСЕ частные лаборатории в моем городе (я на Украине живу, город не маленький, а областной центр с почти миллионом жителей) не делают теперь анализ на ВИЧ, а единогласно отсылают в СПИД-центр. При этом смотрят на меня как на прокаженную. А раньше делали, я 1 раз сдавала до беременности. Ну прям заговор какой-то (((( Просто боюсь, что с такой диагностикой и моими частыми рецидивами волчанки сдача анализа — это как рулетка. В понедельник еще буду звонить в СПИД-центр, еще раз спрошу про иммуноблот, т.к.девочка в регистратуре могла не знать всего, но надежда слабая

Иммуноблоттинг на ВИЧ: особенности проведения и расшифровка результатов

Как проводится диагностика СПИДа иммуноблотом на ВИЧ?

Иммуноблоттинг – диагностическое мероприятие, проводимое в лабораторных условиях, по результатам которого выявляют антитела к возбудителям различных заболеваний.

Одним из таковых выступает вирус иммунодефицита человека.

Сразу стоит отметить, что такое исследование, как иммуноблоттинг на ВИЧ – это дополнительное мероприятие, которое назначают для подтверждения положительного результата ИФА.

В каких случаях назначается анализ

Вирус иммунодефицита человека – медленно прогрессирующая инфекция. Со времени проникновения в организм патогенов и до проявления первой симптоматики часто проходит достаточно продолжительное время, которое может достигать нескольких лет.

На начальном этапе развития клинические проявления могут отсутствовать. Повышение общей температуры, недомогание, боль в горле, характерные ВИЧ-инфекции симптомы, человек путает с банальной простудой, а ведь инфекция продолжает прогрессировать. Поэтому специалисты ВИЧ-центров рекомендуют пройти комплексную диагностику в таких случаях:

  • если случился незащищенный половой акт с новым партнером;
  • если одноразовый медицинский шприц или иглу использовали повторно;
  • если недавно была нанесена татуировка или проведен пирсинг;
  • если обнаружена другая инфекция, путь передачи которой – половой (например, сифилис, бактериальный вагиноз, гонорея);
  • если произошел контакт с инфицированным человеком.

Иммуноблот на ВИЧ  проводится с использованием сыворотки или плазмы крови. Исследование на одном стрипе требует 1,5-2 мл крови или 15-25 мкл сыворотки.

Диагностическое мероприятие позволяет выявить антитела не только к вирусу иммунодефицита человека, но и к другим патогенам. В ходе исследования используют специальные наборы, характерные для различных заболеваний, например:

  • ВПГ1 и ВПГ2 IgM/IgG (для выявления герпесвирусной инфекции);
  • TORCH-профиль IgM (для выявления токсоплазмоза, краснухи, цитомегаловирусной инфекции, ВПГ 1 и ВПГ 2);
  • ВЭБ IgMTIgG (для выявления вирусной инфекции Эпштейн-Барр);
  • ВГС IgG (для выявления вирусного гепатита типа С).

Результат иммуноблоттинга может быть положительным (когда обнаружены антитела) и отрицательным (когда антитела в биологическом материале отсутствуют), а также неопределенным, ложноположительным и ложноотрицательным.

Где можно провериться на заражение вирусом, и что делать дальше

Каждая поликлиника, частная лаборатория, больница, клиника специализируется на подобном диагностическом мероприятии. Пройти тест можно в центре тестирования ВИЧ. Некоторые частные клиники предлагают услуги по консультированию и тестированию вируса СПИДа и ВИЧ на дому.

Рекомендуется провести один тест спустя 6 недель после предполагаемого заражения и спустя 12 недель. Пройти диагностику разрешается и в более поздний срок: на результат это не влияет.

ВАЖНО! После получения результатов исследования нужно обратиться к лечащему врачу для назначения соответствующей терапии.

Положительные пробы

Если результаты иммуноблота положительные, это еще не значит, что в организме развивается ВИЧ-инфекция. Для подтверждения диагноза назначают иные исследования, например, непрямую иммунофлюоросценцию.

Хоть метод иммуноблота и обладает высокой чувствительностью, однако, за счет определения иммуноглобулинов класса G возможен ложноположительный результат в первые 3 недели после инфицирования. В таком случае проводится тест повторно спустя определенное время.

Все причины получения ложноположительного результата неизвестны. Наиболее распространенными источниками выступают период беременности и недавнее введение вакцины иммунопрепарата. Если по истечении определенного времени после воздействия подобных факторов иммуноблот на ВИЧ  все так же положительный, это означает, что человек инфицирован.

Негативный результат

Иммуноблот может давать отрицательный результат, что сигнализирует об отсутствии в организме антител к ВИЧ-инфекции и, как следствие, – о полном здоровье.

Отрицательный иммуноблот часто наблюдается в «период окна» (в первые 3 месяца между инфицированием и появлением в крови антител). На протяжении данного срока тест не обнаруживает соответствующие антитела, но в иной жидкости (сперме, влагалищном отделяемом) можно выявить таковые и в большом объеме.

Как проводится анализ

Иммуноблот позволяет идентифицировать антитела путем исследования крови и применения гель-электрофореза.

В первую очередь проводится разрушение бактериальных клеток или вирионов ультразвуком, после чего путем электрофореза – разделение всех антигенов вируса или бактериальных клеток. В итоге получается коммерческий реагент, помещаемый на специальную нитроцеллюлозную пленку.

Во время постановки иммуноблоттинга на материал с известным антигеном наносят и исследуемую сыворотку. После того, как провели инкубацию и отмывание несвязавшихся антител, начинают иммуноферментный анализ, наносят на сыворотку иммуноглобулины, которую помечают ферментом, и хромогенный субстрат, меняющий цвет при контакте с ферментом.

Если имеются антитела, на носителе образуются пятна.

Для проведения иммуноблоттинга на ВИЧ используется забор крови

Линейный метод

Линейный блот на ВИЧ – непрямое иммунологическое исследование, методом которого получают качественный показатель аутоантител класса IgG.

В ходе иммунологического исследования используют вирусное вещество ВИЧ-формата или антигены. В лабораторных условиях соединяют белки ВИЧ и отдельные антитела, которые были получены из сыворотки крови. Далее проводится инкубация путем добавления меченых антител и человеческого иммуноглобулина.

Диагностика ВИЧ у новорожденных

В организме ребенка до 9 месяцев, рожденного от инфицированной женщины, присутствуют антитела к ВИЧ матери, что становится причиной получения ложноположительного результата ИФА. По этой причине предпочтение отдают вирусологическим тестам – количественному анализу РНК и ДНК ПЦР. Более чувствителен культуральный метод диагностики инфекции.

ВАЖНО! Показаниями к проведению диагностических мероприятий по выявлению ВИЧ-инфекции у новорожденных выступают: рождение от инфицированной женщины, получение сомнительного результата ранее осуществимого анализа.

Исследование при беременности

Так как ВИЧ-инфекция, развивающаяся у беременной женщины, может передаться будущему ребенку, требуется ранняя диагностика на вирус иммунодефицита.

В первую очередь проводится иммуноферментный анализ, применяемый в качестве скрининга. Диагностическое мероприятие помогает обнаружить в сыворотке крови антитела к инфекции. Несмотря на точные результаты анализа в период беременности, требуется повторное проведение исследования.

Разновидность ИФА – иммунный блоттинг, который часто используют в период беременности. По результатам диагностики можно выявить антитела к определенным антигенам, которые распределены по молекулярному весу методом электрофореза.

Как правильно пройти тест

Иммунный блоттинг на ВИЧ требует специальной подготовки, как и другие методы диагностики заболевания. Если провести некоторые исследования и получить результаты определенных показателей можно на протяжении всего дня (например, ответ на аллерген), то сдавать кровь на иммунологический анализ нужно только в утреннее время.

В предыдущий день перед диагностикой рекомендуется окончить повышенные физические нагрузки. Биологический материал сдают на голодный желудок. Как правило – это кровь с вены, которую в некоторых случаях забирают в несколько пробирок.

Расшифровка результатов

Расшифровку результатов иммуноблотта проводит лабораторный работник. Если обнаружили 2 из 3 протеинов ВИЧ-1 или ВИЧ-2, это указывает на присутствие в организме соответствующей инфекции.

Исследование проводится для подтверждения положительного иммуноферментного анализа. Поэтому реакция проверяется и на такие протеины, как gp120/160, gp41 в сочетании с р24.

Последние – это часть трех генов СПИДа – gag pol and env.

Схематическое отображение результатов иммуноблоттинга на ВИЧ

Первичная диагностика предполагает исследование белков р25, gp110/120 и gp160, указывающих на раннюю стадию развития заболевания. При положительном результате, который дал второй серологический иммуноферментный анализ, проводится иммуноблот. Если и последний дал положительный результат, диагноз ВИЧ подтверждают.

Вероятность положительного результата зависит от периода, который прошел от момента инфицирования до проведения диагностики:

  • спустя 28 дней – 60-65%;
  • спустя 42 дня – 80%;
  • спустя 56 дней – 90%;
  • спустя 84 дня – 95%.

Ложноположительный результат возможен, если забор биологического материала для дальнейшей диагностики проводился в период беременности, при нарушении гормонального фона, продолжительном подавлении иммунной функции определенными препаратами, которые принимает человек.

Критерии оценки анализа

Результаты анализа ИФА и иммуноблоттинга должны соответствовать следующим критериям:

  • блот исследуемого биологического материала совпадает с блотом образца сравнения;
  • молекулярная масса основного выявленного компонента соответствует требованиям спецификации.

Результаты полученные в специализированной лаборатории будут наиболее точными

Выявляемая примесь и ее содержание должны отвечать требованиям свидетельства на стандартный образец.

Неинтерпретируемые результаты

В некоторых случаях иммуноблоттинг на ВИЧ и СПИД не соответствует отрицательному и положительному результату, причем врач не может определить истинную причину сомнительных сведений. Часто причиной неправильной  интерпретации выступает инфицирование, вызванное другим серотипом.

Для устранения сомнений ПЦР и ИФА проводятся в динамике. При отсутствии характерной заболеванию симптоматики на протяжении полугода и факторов риска говорят о полном здоровье. На этом этапе диагностические мероприятия оканчивают.

Сомнительный результат также можно получить при развитии в организме иного инфекционного заболевания, ракового новообразования, аллергической реакции.

Важно! При сомнительном результате человек не может быть донором крови и другого биологического материала.

Типичные ошибки при диагностике ВИЧ инфекции

Забор биологического материала, доставка и оформление материалов, используемых при проведении лабораторной диагностики, должны соответствовать следующим правилам:

  1. Сопроводительная документация оформляется с указанием наименования тест-системы, ее срока годности и серии.
  2. Полностью указаны паспортные данные обследуемого, дата, место забора биологического материала.
  3. Сыворотка хранится не дольше установленного срока, для исследования берется допустимый объем биоптатат – не меньше 2-5 мл.
  4. Номер на флаконе соответствует указанному номеру в направлении.
  5. Забор биологического материала происходит по установленным правилам, а именно, из локтевой вены. В составе исследуемой крови не должно быть сгустков.

Для забора материала используется сухая пробирка. У новорожденных часто берут пуповинную кровь, указывая о таком факте в направлении.

Типичная ошибка врачей – хранение полученного материала дольше 12 часов при комнатной температуре и дольше 1 дня при температуре 4-8 градусов выше по Цельсию. За счет наступающего гемолиза искажаются результаты диагностического мероприятия.

Итак, к типичным ошибкам во время проведения диагностики ВИЧ-инфекции относят:

  • неправильный забор биологического материала;
  • неправильное хранение биоптата;
  • неправильная транспортировка диагностических систем;
  • длительное хранение тест-системы.

На результат влияет даже качество воды, используемой для промывания тары, в которую помещают биологический материал.

После получения результатов исследования лабораторный работник должен выдать для врача заключение. Если диагностика проводилась в «период окна», он назначает повторное проведение диагностики спустя определенное время. В любом случае, чтобы поставить диагноз «ВИЧ-инфекция», одного иммуноблота недостаточно. Необходима комплексная диагностика.

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.